恒溫熒光PCR儀是一種結(jié)合恒溫擴增技術與熒光檢測技術的實驗設備，能夠在恒定溫度下對DNA或RNA進行快速、準確的擴增和定量檢測。
 

　　恒溫熒光PCR儀其技術原理介紹：
 

　　恒溫擴增：
 

　　無需傳統(tǒng)PCR的溫度循環(huán)(變性、退火、延伸)，通過特定酶系統(tǒng)(如Bst DNA聚合酶)和引物設計，在單一溫度(通常為60-65℃)下完成核酸的持續(xù)復制。
 

　　常見技術包括LAMP(環(huán)介導等溫擴增)、RPA(重組酶聚合酶擴增)、NASBA(依賴核酸序列的擴增)等。
 

　　熒光檢測：
 

　　熒光染料嵌入法：如SYBR Green I等染料可嵌入雙鏈DNA的凹槽中，熒光強度與雙鏈DNA總量正相關，間接反映擴增產(chǎn)物的積累。
 

　　熒光探針法：如TaqMan探針、分子信標等，探針兩端分別連接熒光基團和淬滅基團。擴增過程中，探針與模板結(jié)合后被切割或構象變化，熒光基團與淬滅基團分離，釋放熒光信號。
 

　　數(shù)據(jù)采集與分析：
 

　　熒光信號被檢測器捕獲并轉(zhuǎn)化為熒光值，根據(jù)熒光值的變化定量測定DNA的含量和擴增情況。
 

　　軟件自動計算閾值(threshold)，當熒光信號超過閾值時，記錄對應的擴增時間(Tt值或Ct值的恒溫替代指標)，并根據(jù)標準曲線推算樣本中靶標的初始濃度。